簡(jiǎn)述一下invitrogen膠原蛋白酶的凍干過(guò)程
瀏覽次數(shù)：2032發(fā)布日期：2022-05-23
invitrogen膠原蛋白酶是一種從白色念珠菌分離出來(lái)的強(qiáng)力蛋白溶解酶，具有很高的比活性，是DNA提取的關(guān)鍵試劑。該酶在較廣的pH范圍(4?12.5)內(nèi)及高溫(50?70°C)均有活性，用于質(zhì)粒或基因組DNA、RNA的分離。在DNA提取中，主要作用是酶解與核酸結(jié)合的組蛋白，使DNA游離在溶液中，隨后用不同方法進(jìn)行抽提，除去雜質(zhì)，收集DNA。EDTA等螯合劑或SDS等去垢劑均不能使之失活。invitrogen膠原蛋白酶貯存液一般為10mg/ml或20mg/ml。貯存于一20°C。invitrogen膠原蛋白酶溶液為無(wú)色透明，如出現(xiàn)沉淀就不能再使用。
使用凍干機(jī)凍干invitrogen膠原蛋白酶的凍干過(guò)程中預(yù)凍階段內(nèi)溫度下降曲線與隔板溫度下降曲線基本保持一致，只是其斜率略低。
在一次干燥階段，樣品溫度隨隔板升溫而升溫，隔板溫度達(dá)到預(yù)定溫度后基本維持不變，而樣品溫度波動(dòng)較大，10.5h后樣品溫度波動(dòng)幅度逐漸縮小。
在二次干燥階段，樣品溫度隨隔板上升斜率較一次干燥階段有所提高，隔板溫度達(dá)到預(yù)定溫度后基本維持不變，而樣品溫度有小幅波動(dòng)，22h后樣品溫度逐漸接近隔板溫度。
在一階段和二階段，冷凝器溫度基本維持在-45℃～-40℃，冷凝器在二階段干燥階段溫度波動(dòng)比一階段干燥階段明顯減少。
在預(yù)凍階段內(nèi)，凍干倉(cāng)壓力下降迅速。在一次干燥階段的初始階段(4.0～7.5 h)，凍干倉(cāng)壓力隨隔板升溫而提高；在中間階段(7.5～12.0h)，凍干倉(cāng)壓力波動(dòng)較大，與樣品溫度波動(dòng)有一定的一致性；在結(jié)尾階段(12.0～13.5h)，凍干倉(cāng)壓力波動(dòng)漸趨平靜。
